簡要總結(jié)

在晚期非小細(xì)胞肺癌中ALK融合變異的檢出是ALK-TKI靶向治療的必要條件。目前ALK融合的檢測方法主要有IHC、FISH和NGS，但由于存在ALK融合變異頻率較低、腫瘤組織樣本難于獲取以及檢測技術(shù)的局限性而面臨融合檢出的挑戰(zhàn)。研究者在1246例NSCLC病例中比較了RNA-based NGS與IHC和FISH檢測技術(shù)之間的一致性和靈敏度等，發(fā)現(xiàn)RNA-based NGS檢測周期及結(jié)果準(zhǔn)確性均較好。表明采取RNA-based NGS檢測代替IHC的方法，可以更有效地評(píng)估ALK融合狀態(tài)。

背景介紹及結(jié)果分析

肺癌仍然是全球癌癥死亡的最常見原因，其中非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）占80%-85%。 ALK融合變異是NSCLC中常見驅(qū)動(dòng)基因突變之一，變異頻率大約在5%-7%左右，因其靶向藥使用時(shí)間長，平均生存期也長，被稱為“鉆石突變”。隨著近期阿來替尼在早期術(shù)后輔助治療的獲批，使得ALK檢測的必要性更加充分。

FISH是檢測重排的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是檢測周期比較耗時(shí)，且需要專門的儀器設(shè)備和對(duì)應(yīng)的專業(yè)知識(shí)來解釋各種信號(hào)結(jié)果。當(dāng)面臨腫瘤組織樣本各種問題和腫瘤細(xì)胞百分比非常低的情況下，一些樣本無法滿足FISH標(biāo)準(zhǔn)分析。隨著高性能單克隆抗體的出現(xiàn)，IHC已逐漸應(yīng)用于融合變異的檢測。雖然IHC結(jié)果更容易解釋，也不需要像FISH那樣的專門設(shè)備，且IHC和FISH之間的一致性很高，但依然不能取代FISH的應(yīng)用。由于技術(shù)問題和不同ALK融合變體產(chǎn)生的ALK蛋白活性不同，常規(guī)實(shí)踐中有時(shí)會(huì)產(chǎn)生不一致的結(jié)果。

NGS可以從既往FISH陰性的樣本中檢出融合變異，且一次可以同步檢測多種可用藥靶點(diǎn)。然而，在常規(guī)的臨床實(shí)踐中NGS也存在其不可避免的難題。研究者就三種不同檢測技術(shù)在大樣本量的真實(shí)世界研究中進(jìn)行對(duì)比分析，并結(jié)合檢測周期進(jìn)行綜合評(píng)估。

1246例NSCLC患者進(jìn)行了ALK IHC評(píng)估，其中有51例(4%)顯示明確陽性，1174例樣本為陰性，同時(shí)有21例樣本為非特異性染色結(jié)果。ALK FISH分析結(jié)果53例(4.2%)為陽性。其中有2例經(jīng)免疫組化檢測為非特異性染色，但通過RNA-NGS檢測到ALK 5′/3′端表達(dá)不平衡，預(yù)測為融合變異。RNA-NGS檢出59例（4.7%）為陽性。

RNA-NGS檢出的ALK融合變異中，92%為EML4-ALK，同時(shí)還有DCTN1-ALK、KIF5B-ALK、STRN-ALK以及融合伴侶不詳?shù)?′/3′表達(dá)不平衡融合。

圖1.RNA-NGS檢出的ALK融合類型

59例NGS分析結(jié)果為陽性的樣本中，有53例(89.8%)例經(jīng)驗(yàn)證為FISH陽性，51例為IHC陽性。NGS檢測出的9例ALK 5'/3'端表達(dá)不平衡的樣本中有6例經(jīng)過FISH和IHC檢測均為陰性，提示其為NGS假陽性樣本。

 圖2.NGS、FISH、IHC檢測ALK融合的結(jié)果分布情況

在ROC曲線分析中，當(dāng)免疫組化分值為145時(shí)，RNA-NGS相比于IHC在檢測ALK融合的特異性為98.99%，靈敏度為100%，NPV（陰性預(yù)測值）為100%，PPV（陽性預(yù)測值）為98.04%。

研究者還結(jié)合了報(bào)告周期的評(píng)估，該研究調(diào)研范圍內(nèi)NGS報(bào)告的平均周期為4天（3-8天），ALK IHC報(bào)告平均耗時(shí)2天(2 - 5天)，ALK FISH報(bào)告平均耗時(shí)13天(6 - 21天)。

本研究結(jié)論

該研究通過分析RNA-NGS與IHC在ALK融合檢測中的靈敏度與特異性，并結(jié)合檢測周期綜合評(píng)估（例如，對(duì)于IHC結(jié)果不太確定需要進(jìn)行FISH驗(yàn)證時(shí)，總體檢測周期無疑再次被拉長，且檢測成本升高，病理實(shí)驗(yàn)室工作量加大，且對(duì)于少量活檢或腫瘤細(xì)胞含量低的樣本增加其消耗），建議使用RNA-NGS做為******進(jìn)行ALK融合狀態(tài)的檢測。然而，在NGS結(jié)果不確定的情況下，或者在特定情況下，如年輕和/或非吸煙者患者，或根據(jù)醫(yī)生的特定要求，也可考慮ALK FISH。

參考文獻(xiàn)

Ilié, M.; Goffinet, S.; Rignol, G.; Lespinet-Fabre, V.; Lalvée, S.; Bordone, O.; Zahaf, K.; Bonnetaud, C.; Washetine, K.; Lassalle, S.; et al. Shifting from Immunohistochemistry to Screen for ALK Rearrangements: Real-World Experience in a Large Single-Center Cohort of Patients with Non-Small-Cell Lung Cancer. Cancers 2024, 16, 2219. https://doi.org/ 10.3390/cancers16122219

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